Design and assembly of microfluidic paper-based analytical devices (µPADs) for the quantification of nitrite and nitrate in saliva

Nos últimos anos, investigadores, com o auxílio de novas tecnologias, têm trabalhado para o desenvolvimento de técnicas e dispositivos de diagnóstico e tratamento mais práticos e económicos. Neste trabalho foram desenvolvidos dois dispositivos microfluídicos analíticos baseados em papel (μPADs) para a determinação dos aniões nitrito e nitrato em amostras de saliva humana, para auxílio no diagnóstico de doenças associadas à sua presença. Para desenvolver estes μPADs foram realizados vários estudos de desenho e construção, incluindo um teste de interferências e estudos de estabilidade. A estrutura final do μPAD para a determinação de anião nitrito consistiu em duas camadas de discos de papel de filtro com 9.5 mm de diâmetro numa bolsa de plastificação, em que a última camada continha 5 μL de reagente de Griess. Este μPAD permitiu a determinação de nitrito num intervalo de 5 – 220 μM, cujos limites de deteção e quantificação foram 0.05 μM e 0.17 μM, respetivamente. A estrutura final do μPAD para a determinação de anião nitrato consistiu em três camadas de papel de filtro numa bolsa de plastificação, em que a primeira camada continha zinco em pó e a última camada 10 μL de reagente de Griess. Este μPAD permitiu a determinação de anião nitrato num intervalo de 0.2 – 1.2 mM, cujos limites de deteção e quantificação foram 0.08 mM e 0.27 mM, respetivamente. Ambos os μPADs se mostraram estáveis quando armazenados em vácuo (durante pelo menos 7 dias no caso do μPAD de nitrito, e durante no máximo 3 dias no caso do μPAD de nitrato) e, após colocação da amostra, os μPADs de nitrito e nitrato poderiam ser digitalizados até 4 e 2 horas depois, respetivamente. Por último, para validar este método, os resultados obtidos com o μPAD de nitrito foram comparados com os correspondentes aos obtidos pelo método colorimétrico de referência, e não foram encontradas diferenças estatisticamente significativas entre os dois métodos. Logo, foi possível concluir que os μPADs desenvolvidos demonstraram possuir propriedades promissoras para a determinação de NOX em amostras de saliva, principalmente porque são dispositivos sensíveis, portáteis, simples e económicos, que custam menos de 50 cêntimos cada.