New cell lines for the manufacture of lentivirus

  • Diogo Lima de Vilhena Magalhães Costa (Aluno)

Tese do aluno

Resumo

Contexto: A terapia génica consiste num tratamento médico que visa a modulação da expressão génica de um individuo. Com este fim, foram desenvolvidos diversos veículos de transferência de genes, denominados vectores. Estes incluem os vectores derivados de vírus. Apresentando características promissoras, os vectores lentivirais ainda têm problemas a si associados, especialmente no processo de produção, que é limitado pelos baixos títulos obtidos. Para aumentar os títulos de vectores virais e o crescimento das células produtoras, estas expressam oncogenes, tais como o Large T antigen (T-Ag) do SV40, a custo de preparações do vector menos seguras. Objectivos: Com o objectivo de encontrar linhas celulares alternativas às HEK293T adequadas à produção de elevados títulos de vectores virais, três linhas celulares não humanas foram transformadas com o oncogene T-Ag e transfectadas com uma construção lentiviral. A produção do vector e eficiência de transfecção foram caracterizadas. Também foi avaliada a força de vários promotores para a expressão dos componentes virais nestas células. Resultados e conclusões: O CAG e o CMV foram os mais promissores, mas com o CAG obtiveram-se títulos mais baixos. Neste trabalho, foi observado que as linhas celulares Age1.CR e Vero têm potencial para produzir títulos de vectores superiores quando expressam o T-Ag, o que pode estar ligado a maiores eficiências de transfecção. Para além disso, células HEK293 que expressam o T-Ag foram comparadas à sua linha parental em termos de crescimento celular e glicólise, tentando compreender melhor as alterações induzidas pelo oncogene. Os resultados obtidos neste trabalho vão contribuir para o desenvolvimento de linhas celulares estáveis para produção de vectores lentivirais, e para o aumento da compreensão da influência do T-Ag na produção viral.
Data do prémio14 nov. 2023
Idioma originalEnglish
Instituição de premiação
  • Universidade Católica Portuguesa
SupervisorAna Sofia Coroadinha (Supervisor)

Keywords

  • Linha celular
  • Retrovírus
  • Terapia génica

Designação

  • Mestrado em Engenharia Biomédica

Citação

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