Regulation of the pore-forming translocon of the type III secretion system by the EspC Serine Protease in Enteopathogenic Escherichia Coli

Resumo

As bactérias do grupo Escherichia coli enteropatogénica (EPEC) são uma das maiores causas de diarreia fatal em crianças com menos de cinco ano nos países em desenvolvimento. A virulência de EPEC depende da presença do sistema de secreção do tipo III (SST3). O SST3 é constituído por um corpo basal situado entre a membrana externa e interna da bactéria, prolongado por uma agulha que é projetada a partir da superfície da bactéria. No caso de EPEC, a agulha do SST3 é prolongada por um filamento formado pela proteína hidrofílica, EspA. Depois de contactar com a célula hospedeira, o sistema ativa a secreção de duas proteínas hidrofóbicas, EspD e EspB. Estas proteínas inserem-se na membrana plasmática da célula hospedeira para formar o transclocão. O translocão é uma estrutura chave para formar o poro na membrana da célula hospedeira pelo qual os efetores são inseridos na célula. O laboratório onde se realizou este trabalho estuda o papel da proteína EspC, que pertence à família SPATE (serine protease autotransporter of Enterobacteriaceae), na regulação e funcionamento do translocão. EspC é secretada pelo sistema de secreção do tipo V, sendo independente do SST3. Foi demonstrado que EspC tem um papel importante no controlo da formação do poro membranar e da virulência mediada pelo SST3. EspC tem preferencialmente como alvo os complexos de EspA-EspD, envolvidos na formação do poro membranar, presumivelmente após o destacamento do translocão do filamento da agulha. Este trabalho de estágio utilizou procedimentos de purificação para isolar o complexo EspA-EspD sensível à proteólise de EspC com o objetivo de realizar a caracterização estrutural deste complexo por Microscopia Eletrónica. Implementamos várias fases de purificação distintas para aumentar a pureza das amostras contendo os complexos desejados. Conseguimos isolar complexos homogéneos contendo EspA que mostram um estrutura em forma de anel com um diâmetro externo de 10 nm e um interno de 4 nm.

Data do prémio	22 set. 2016
Idioma original	English
Instituição de premiação	Universidade Católica Portuguesa
Supervisor	Guy Tran Van Nhieu (Supervisor)